gDNA产量–光度计无法说明全部事实!

短的DNA片段表明更高的gDNA产量

如果未在纯化过程中使用额外的RNA酶,则 使用Silica试剂盒(结合洗脱法)提取的DNA包含大量共纯化的小片段DNA和RNA。所得的OD读数具有误导性,表明基因组DNA的量比实际获得的高得多。

在所描述的实验中,使用普通的硅胶试剂盒(供应商Q)或EchoLUTION组织DNA微型试剂盒(每个4个样品)从10 mg大鼠大脑中提取DNA。光度法表明使用硅胶试剂盒(图)可提高DNA产量2倍。但是,如果将相同样品加载到琼脂糖凝胶上进行分析,很明显,硅胶试剂盒的实际gDNA含量要比EchoLUTION试剂盒低很多。

RNA同样的问题

由于RNA的OD 260比DNA的OD260增加了至少25%的总量,因此可以很容易地解释观察到的通过光度法计算并与凝胶分析相比较的DNA浓度的巨大差异。

因此,为了比较从硅胶和BioEcho DNA提取试剂盒获得的DNA制备物的产量,我们建议始终执行凝胶分析或功能分析,例如qPCR。

光度法:使用硅胶结合洗提试剂盒对gDNA进行误导分析-使用BioEcho单步技术校正


 

结合洗脱洗脱真的是最好的产量吗?

由于其非特异性核酸结合方法,Silica试剂盒可纯化任何核酸,包括不需要的小DNA分子和RNA,而EchoLUTION技术只能以高收率提取目标高分子量DNA。

如果科学家仅依靠光度法,那么gDNA的产量通常会被大大高估;诸如PCR / qPCR或NGS之类的下游分析将因此灵敏度低,并且在逻辑上常常失败。

此外,基于硅胶的提取物纯度较低,例如,是由于残留的小分子可能抑制酶促反应而引起的,如果输入的DNA浓度太低,则纯度更高!相反,EchoLUTION纯化的DNA始终不含抑制剂,污染了RNA和小DNA。只有这些OD读数是可靠的,并且代表了真正的DNA浓度和产量!

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